雞傳染性法氏囊病抗體檢測試劑盒（競爭ELISA）

介紹

雞傳染性法氏囊病病毒抗體檢測試劑盒檢測雞血清中的雞傳染性法氏囊病病毒中和抗體，用于評估養雞場雞傳染性法氏囊病疫苗免疫產生的中和抗體的狀況及感染雞的血清學輔助診斷。

雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白具有一個構象依賴性（不連續）的中和抗原決定簇，研究發現針對這個抗原決定簇的抗體可以被動地保護雞免受雞傳染性法氏囊病病毒的感染。本試劑盒采用競爭ELISA法，在酶標板條微孔上預包被雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白，運用抗VP2蛋白單克隆抗體與血清中的抗VP2蛋白抗體競爭固相載體中的VP2蛋白結合位點，從而間接檢測血清中的抗VP2蛋白抗體。在試驗中，加入待檢血清及抗VP2蛋白的單克隆抗體，經過溫育后，若樣品中含有雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白特異性抗體，則與包被板上的抗原結合，從而阻礙了抗VP2蛋白單抗與抗原的結合，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后；再加入抗小鼠酶標二抗，與檢測板上的抗原抗體復合物發生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶結合物；在微孔中加入TMB底物顯色，樣本的吸光度值與其所含有的抗VP2蛋白抗體的含量成負相關，從而達到檢測樣品中抗VP2蛋白抗體的目的。

組份

需自備的設備及試劑

1. 微量移液器： 0.5μl-10μl、10μl-100μl、100μl-1000μl。

2. 一次性移液器吸頭。

3. 量筒：500ml。

4. 96孔板酶標儀。

5. 蒸餾水或去離子水。

6. 洗瓶或洗板機。

樣品制備

取動物全血，按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。

洗滌液的準備

濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫，如有鹽結晶，搖動使結晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

抗VP2單抗工作液的準備（現配現用）

先計算好單抗工作液的用量，再將101倍濃縮的抗VP2單抗按1：101的體積比用單抗稀釋液稀釋（例如：900μl單抗稀釋液中加9μl濃縮的抗VP2單抗，可以滿足10個微孔的用量；每次稀釋時應多稀釋100μl，以避免加樣時的損耗而造成液體量不足）。

注意事項

1. 試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫，使用前應搖勻，使用后放回2-8℃。

2. 不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時應防止試劑污染。

3. 顯色液和終止液對皮膚和眼可能有刺激性，使用時應該注意防護。

4. 顯色液不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。

5. 檢測板拆封后應避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2-8℃)。

6. 所有廢棄物在丟棄之前應合理處理以免污染。

7. 嚴格遵守操作說明可以獲得最好的結果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精確。

操作步驟

1. 取預包被的檢測板（根據樣品多少，可拆開分次使用），加入待檢血清10μl到檢測板孔底，同時設陰性2孔和陽性對照1孔，取陰性及陽性對照各10μl分別加入反應孔中，立即加入90μl單抗工作液。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出）。

2. 蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘。

3. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，用洗滌液洗5次。每次用洗滌液注滿板孔（約250μl）。洗滌5次后在干凈吸水紙上拍干。

4. 每孔加酶結合物100μl，蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘。

5. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗滌5次, 方法同2。切記最后在干凈吸水紙上拍干。

6. 每孔顯色液100ul，蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘。

7. 每孔加終止液50μl，使反應終止，10分鐘內測定結果。

結果判定

用酶標儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度OD值。

試驗成立的條件是：

陰性對照（N）OD值>0.5；

陽性對照（P）S/N值<0.4。

計算方法：

樣品OD值/陰性對照OD均值=S/N值。

陰陽性判斷：

S/N值≥0.5則判斷為陰性；

S/N值<0.5則判斷為陽性。

貯存方法： 2 - 8oC下貯存。

有效期： 12個月。