豬，牛，羊O型口蹄疫抗體檢測試劑盒（阻斷ELISA）

介紹

口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus, FMDV）抗體檢測試劑盒用于檢測豬、牛、羊血清中的O型口蹄疫病毒抗體，用于評估口蹄疫苗免疫狀況。

本試劑盒采用阻斷ELISA法，在酶標板條微孔上預包被口蹄疫病毒抗原。在試驗中，加入稀釋后的待檢血清，經過溫育后，若樣品中含有口蹄疫病毒抗原特異性抗體，則與包被板上的抗原結合，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后；再加入酶標的抗VP1單抗，樣本中的抗體阻斷了單抗與包被板上抗原的結合；經洗滌除去未結合的酶結合物；在微孔中加入TMB底物液，經酶催化產生的藍色信號與樣本中的抗體含量成反比，加入終止液終止反應后，用酶標儀450nm波長測定反應孔中的吸光度A值。

組份

需自備的設備及試劑

1. 微量移液器：10μl-100μl、100μl-1000μl。

2. 一次性移液器吸頭。

3. 量筒：500ml。

4. 96孔板酶標儀。

5. 蒸餾水或去離子水。

6. 洗瓶或洗板機。

樣品制備

取動物全血，按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。

洗滌液的準備

濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫，如有鹽結晶，搖動使結晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

注意事項

1. 試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫，應將試劑盒各組份放置室溫至少1小時以上。使用前應搖勻，使用后放回2-8℃。

2. 不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時應防止試劑污染。

3. 底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性，使用時應該注意防護。

4. TMB（顯色液）不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。

5. 檢測板拆封后應避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2-8℃)。

6. 所有廢棄物在丟棄之前應合理處理以免污染。

7. 嚴格遵守操作說明可以獲得最好的結果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精確。

8. 抗原包被板為一次性用品，不得重復使用；

操作步驟

1. 每次試驗均設置陽性對照1孔、陰性對照2孔，陰、陽性對照不用稀釋，直接取100ul加入反應孔。

2. 將樣品稀釋液按80ul/孔加入到微孔反應板內，之后將待檢樣品血清按20ul/孔加入孔內并吹打混勻（移液器槍頭請勿混用）；

3. 蓋上封板膜（可按實際需要自行裁剪），置37℃溫育60分鐘。

4. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul，后甩去孔內液體，以上步驟重復4-6次，最后在干凈吸水紙上拍干。

5. 每孔加酶結合物100μl，蓋上封板膜，置37℃溫育60分鐘。

6. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗滌4-6次, 方法同4。切記最后在干凈吸水紙上拍干。

7. 每孔加顯色液100μl，混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鐘。

8. 每孔加終止液50μl，使反應終止，10分鐘內測定結果。

結果判定

用酶標儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度OD值。

試驗成立的條件是：

陰性對照(N)OD值>0.5，同時陽性對照(P)阻斷率>50%；

計算方法：

PI (阻斷率)=  1 —（樣品OD值 ÷ 陰性OD均值）

陰陽性判斷：

牛、羊樣本

PI(阻斷率)>45%則判斷為陽性；

PI≤45%則判斷為陰性。

豬樣本

PI(阻斷率)>35%則判斷為陽性；

PI≤35%則判斷為陰性。

貯存方法： 2 - 8oC下貯存。

有效期： 12個月。